多聚甲醛固定？多聚甲醛用途是什么
植物根茎组织可以一直放在4%多聚甲醛里固定保存吗
植物根茎组织不可以一直放在4%多聚甲醛里固定保存。根据查询多聚甲醛产品使用说明得知，使用4%的多聚甲醛可以固定标本不能超过48小时，固定时间太久组织会变脆，如果是在温度4度以下最多可以放一个月，所以植物根茎组织不可以一直放在4%多聚甲醛里固定保存。多聚甲醛固定的目的是用于保存细胞和组织的原有形态结构。
12孔板细胞多聚甲醛固定怎么*作
1、在培养板中培养好细胞后，吸除培养基，使用PBS轻洗细胞2×3min，做固定（凋亡的TUNEL染色等可以不清洗）。
2、固定：加入4%多聚甲醛(PBS配制)固定20分钟。如暂时不能立即做组化检测，使用含0.4%多聚甲醛的PBSPH7.4浸泡细胞（免疫组化检测完成前不要让细胞变干，否则细胞收缩形态不好）。
3、除去多聚甲醛，使用PBS轻洗细胞3×3min。
4、通透：0.5%TritonX-100(PBS配制)室温通透20min（细胞膜上表达的抗原省略此步骤）。
5、除去TritonX-100，使用PBS轻洗细胞3×3min。
6、内源性过氧化物酶处理：3%H2O2孵育15min（选做，必做二抗连HRP，其他的如做免疫荧光染色不用做）。
7、除去H2O2，使用PBS轻洗细胞3×3min。
8、封闭：用10%的与二抗同源的血清(PBS配制)封闭半小时。封闭结束后不要洗，直接上一抗。
9、一抗：滴加足够量适宜浓度的一抗，4℃孵育过夜（或37℃，60min）；若有两种一抗（要是不同种属的）则同时孵育，两种二抗亦同时孵育（二抗同时使用时最好是同一种属）。
10、除去一抗，使用PBS轻洗细胞3×3min。
11、二抗：滴加足够量适宜浓度的二抗，37℃，30min（从加荧光二抗起，后面所有*作步骤都尽量在较暗处进行）。
12、除去二抗，使用PBS轻洗细胞3×3min。
13、二氨基联苯胺（DAB）底物显色：室温下避光孵育5至10分钟，或直至样本出现棕褐色（选作，二抗连得是酶的必做，显色时间严格控制，要避免显色过度引起假阳性；二抗连的是荧光素的不用做）。
14、除去显色工作液，使用PBS冲洗细胞3~4次。
15、复染核：0.5ug/mlDAPI（或200nMHoechst33342）避光孵育5min。
16、使用PBS轻洗细胞4×5min，洗去多余的DAPI。
17、取爬片时将注射器针头针尖向背面做个小钩，将爬片轻轻勾起，用小镊子取出。
18、用吸水纸吸干爬片上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，在荧光显微镜下观察并采集图像。
19、保存细胞爬片，在培养皿底放一层面巾纸，放爬片，便于实验取片。在盖子上做标记，在-20℃可保存2-3个月。
动物脏器多聚甲醛固定后储存条件
动物脏器多聚甲醛固定后储存条件：常温下储存。4%多聚甲醛固定时间不要太久，固定后可以放在梯度蔗糖中脱水，4度保存。多聚甲醛固定时间是不能太久的，24-48小时足够了。固定时间超过1星期，固定液中的醛类物质会与蛋白形成共价结合，这种结合会导致无论你用什么修复方法，蛋白的抗原表位都无法暴露。
4%多聚甲醛怎么配
4%多聚甲醛怎么配
4%多聚甲醛是常用固定液，4%指的是最终的质量体积比，因此，应该是定容至1 L。如果加液1 L，40 g PFA溶入后体积稍有增加，得到的实际浓度略小于4%，但固定液的浓度要求并不是非常精确，这点浓度变化常常不会对固定效果产生影响。
多聚甲醛(Paraformalclehyde)又称固体甲醛，是一类线型短链的聚氧甲撑二醇HO(CH2O)nH(式中的n=8–100)混合物，其中还含有少量水份和甲醇。多聚甲醛性状为甲醛的固体聚合物。白色无定型粉末，有辛辣气味。
其配制方法如下：
（1）4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.3）
试剂：多聚甲醛40g
0.1mol/L磷酸缓冲液至1000ml
配制方法：称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500～800ml 0.1mol/L磷酸缓冲液（Phosphate Buffer以下简称PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）使粉末*溶解，通常需滴加少许1n NaOH才能使溶液清亮，zui后补足0.1mol/L的PB于1000ml，充分混匀。
该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究，是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定2～24h。另外，该固定剂较为温和，适于组织标本的较*保存。
（2）4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢yang化钠
试剂：A液：多聚甲醛40g
蒸馏水400ml
B液：Na2HPO4·2H2O16.88g
蒸馏水300ml
C液：NaOH3.86g
蒸馏水200m
配制方法：A液在500ml的三角烧瓶中配制（方法同前），至多聚甲醛*溶解后冷却待用。注意，在溶解多聚甲醛时，要尽量避免吸入气体或溅入眼内。
B液和C液配制好后，将B液倒入C液中，混合后再加入A液，以1n NaOH或1N HCl将pH调至7.2～7.4，zui后，补充蒸馏水至1000ml充分混合，4℃冰箱保存备用。
该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，加入少量新鲜配制的戊二醛，使其终浓度为0.5%～1%。该固定剂较温和，适于组织的*保存。组织标本于该固定液中，4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。
多聚甲醛固定后利用
多聚甲醛固定，确实是老生长谈，很多研究生在做实验时，可能很多师兄师姐都让他们用多聚甲醛固定，有些可能是为了长时间保存样本，希望集中起来染色，有些可能是染色后排不上队，想保持长时间质量稳定。于是就这么口口相传下来了。
预固定问题
做科研或临床时，可能很多FLOWER习惯性都会用4％多聚甲醛预先固定标本，可能出于三个目的：（1）为了灭活标本里面可能存在的微生物（细菌、病毒等），起到安全保障作用。（2）希望标本能够较长时间存放。（3）做胞内染色前的准备。但是，可能很多人忽视了一点，就是如果在染色之前用多聚甲醛固定标本，细胞表面有些位点在固定后构象发生改变，使得抗体无法结合产生假阴性，也可能由于固定作用，导致其它位点产生非特异性结合（假阳性）。
因此，知道哪些抗体染色前不能预固定，十分重要。幸好，我们自己不用做验证，在Biolegend*网站[1]，贴心的技术人员已经帮我们做了一系列测试，下面两张表，一张是人类抗原，一张是小鼠抗原，可以看的出来，大多数不能做预固定的抗体都是趋化因子受体，所以，大家在实验中千万要注意不要先固定后染色。
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表1、4％多聚甲醛预固定对各种抗体表面染色的影响（人类），打勾的为允许预固定，打叉的表示预固定影响很大
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表2、4％多聚甲醛预固定对各种抗体表面染色的影响（小鼠），打勾的为允许预固定，打叉的表示预固定影响很大
染色后固定问题
染色后的固定，就与抗原构象关系不大了，更多的是荧光素。以前4色以内的时候，用的荧光素都是非串联的，因此大多数影响不大，但随着各种新型串联染料的出现，多聚甲醛固定就成了问题了。
事实上，当你去搜索串联染色标记（如PE-cy7、APC-cy7等）的抗体时，会发现一些比较详细的描述里面会注明（以BD网站搜索APC-cy7各类抗体为例）：
Fixed cells should be analyzed within 4 hours of fixation in paraformaldehyde or transferred to a paraformaldehyde-free buffer for overnight storage.
意思就是用多聚甲醛固定过的样本，必须在4小时内检测，否则容易导致串联染料降解，若要长时间保存，还是需要洗涤后，转移到不含多聚甲醛的缓冲液中。
需要注意的是，做GFP荧光检测的同学，也需要注意一下，多聚甲醛固定也会影响GFP，New York Medical College的Paul A Lucas认为是由于多聚甲醛固定后，并非使GFP荧光淬灭，而是使GFP蛋白构象发生改变，无法产生荧光[2]。有时候你固定后检测到的荧光可能是自发荧光，或剩余的未被改变构象的GFP发出的。
解决方案
1、如果检测的是前述表格中容易被多聚甲醛影响的分子，请尽量不要预固定，如需长期保存样本，可以考虑冻存单个核细胞。
2、如果检测的是前述表格中不会受多聚甲醛影响的分子，可用1％多聚甲醛预固定保存，但不能长时间使用，否则对细胞FSC、SSC和荧光强度影响大。此时可考虑使用流式中文网的FlowGuard®细胞保存液[3]，FlowGuard®是国内专利性原研产品，不含多聚甲醛，能缓释出一种特殊的弱固定成份，FSC的变化较多聚甲醛轻微，对抗原强度保持更长久，样本:保存液＝6:1～10:1，21天内检测结果稳定性好。
3、如果希望在染色后保持24小时左右的荧光稳定，仍首选建议：避光、4度，我们曾经在10色（BV405、KO、FITC、PE、ECD、PE-cy5.5、PE-cy7、APC、APC-A700、APC-cy7）流式方案非正式测试时，曾经测过数例，在避光、4度保存24小时后，荧光强度几乎无变化，细胞分群良好。如果仍不放心，可考虑购买商品化的适用于串联染料的专用保存剂
本文链接：http://www.hzrhc.com/html/87965285.html
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